Prosedur Pewarnaan Negatif pada Bakteri
Pewarnaan negatif adalah metode pewarnaan sel bakteri yang digunakan untuk mengamati morfologi dan ukuran bakteri. Metode pewarnaan ini hanya menggunakan satu jenis zat pewarna dan bersifat asam. Zat pewarna asam tidak mewarnai dinding sel bakteri, namun hanya mewarnai latar belakang obyek sehingga sel bakteri tampak bening (transparan).
{tocify} $title={Daftar isi}
A. Prinsip dan Kegunaan Pewarnaan Negatif
Zat pewarna yang digunakan dalam pewarnaan negatif sel bakteri adalah Nigrosin atau disebut juga tinta india. Zat warna ini berwarna hitam gelap dengan pH larutan yang rendah (asam). Larutan asam mempunyai muatan negatif sehingga tidak dapat berikatan dengan dinding sel bakteri yang juga bermuatan negatif.
Pewarnaan negatif tidak ditujukan untuk mewarnai sel bakteri, namun untuk mewarnai bagian latar belakang obyek misalnya gelas obyek. Saat dilakukan pewarnaan, sel bakteri akan tampak bening (transparan) dengan latar belakang gelap setelah diamati di bawah mikroskop.
Kegunaan dari pewarnaan negatif adalah untuk mempermudah mengamati morfologi dan ukuran sel bakteri yang sukar diwarnai oleh pewarna sederhana atau zat warna basa, misalnya kelompok bakteri Spirochaeta. Pewarnaan negatif juga dapat digunakan untuk mengamati sel yang masih hidup, karena selama proses pewarnaan tidak perlu dilakukan fiksasi panas. Selain itu pewarnaan negatif juga sering digunakan untuk mempersiapkan sampel-sampel biologis sebelum diamatin menggunakan mikroskop elektron (contohnya bakteri, virus, flagela, protein).
B. Komposisi Reagen Pewarnaan Negatif
| Komposisi | Jumlah |
| Nigrosin (tinta Cina) | 100 gram |
| Formalin | 5 ml |
| Air | 1 Liter |
C. Prosedur Pewarnaan Negatif
- Teteskan satu tetes kecil larutan Nigrosin pada ujung gelas obyek. Kemudian ulaskan satu ose isolat bakteri pada tetesan larutan Nigrosin hingga tercampur. Usahakan jangan terlalu menyebarkan larutan Nigrosin.
- Gunakan obyek gelas lainnya untuk meratakan larutan Nigrosin dengan cara meletakkan di bagian tengah gelas obyek pertama.
- Tarik gelas obyek ke arah belakang hingga menyentuh larutan Nigrosin.
- Tarik gelas obyek ke arah depan hingga mencapai ujung gelas obyek.
- Tunggu ulasan hingga kering dengan sendirinya.
- Tutup ulasan dengan penutup gelas obyek lalu amati dibawah mikroskop dengan perbesaran 1000X yang telah diberi minyak imersi.
D. Interpretasi Hasil Pewarnaan Negatif
Sel bakteri yang terlihat saat pengamatan di bawah mikroskop adalah berwarna transparan dengan latar belakang gelap.
E. Sumber & Referensi
- Rita B Moyes, Jackie Reynolds, Donald P Breakwell. 2009. Preliminary staining of bacteria: negative stain. Curr Protoc Microbiol, doi: 10.1002/9780471729259.
- microbiologyinfo.com/negative-staining-principle-reagents-procedure-and-result/
0 Response to "Prosedur Pewarnaan Negatif pada Bakteri"
Post a Comment