Triple Sugar Iron Agar (TSIA) - Definisi, Komposisi, Cara Pembuatan dan Interpretasi Uji
Medium Triple Sugar Iron Agar atau dapat disingkat TSIA merupakan medium pertumbuhan bakteri yang sering digunakan untuk membedakan tipe pertumbuhan bakteri. Medium TSIA mengandung zat kimiawi khusus sehingga mampu membedakan kelompok bakteri Enterobacteriaceae dengan kelompok bakteri Gram negatif lainnya.
{tocify} $title={Daftar isi}
A. Definisi dan Kegunaan Medium TSIA
Penamaan TSIA diambil dari komposisi di dalamnya. Medium TSIA mengandung 3 jenis gula yaitu berupa glukosa, laktosa, dan sukrosa sehingga disebut triple sugar, serta mengandung besi (iron) dari ferric citrate.
Medium TSIA biasanya digunakan untuk mengidentifikasi kelompok bakteri Gram negatif, yang ditandai dengan kemapuan fermentasi gula dan membentuk Hidrogen Sulfida (H2S). Pembentukan Hidrogen Sulfida (H2S) oleh aktifitas metabolisme bakteri diketahui melalui indikator pH yaitu fenol merah dan FeSO4 ysng di tambahkan di dalam medium.
Phenol Red yang merupakan indikator warna akan berubah warna menjadi kuning apabila berada pada pH rendah (asam) dan akan berubah menjadi merah pekat apabila berada pada pH tinggi (basa). Pembentukan senyawa FeSO4 dapat diamati dengan adanya endapan hitam didalam medium TSIA.
B. Komposisi Triple Sugar Iron Agar (TSIA) - Oxoid
| Komposisi | Jumlah |
| Lab-Lemco powder | 3 gram |
| Yeast extract | 3 gram |
| Pepton | 20 gram |
| Natrium klorida | 5 gram |
| Laktosa | 10 gram |
| Sukrosa | 10 gram |
| Glukosa | 1 gram |
| Ferric citrate | 0,3 gram |
| Sodium thiosulphate | 0,3 gram |
| Phenol red | 0,024 gram |
| Distilled Water | 1 liter |
| Final pH | 7.4 ± 0.2 @ 25°C |
C. Fungsi Setiap Komposisi MediumTSIA
| Komposisi | Fungsi |
| Lab-Lemco powder | sumber vitamin B |
| Yeast extract | sumber nitrogen |
| Pepton | sumber nutrisi |
| Natrium klorida | buffer / mengatur keseimbangan osmosis |
| Laktosa | sumber karbohidrat |
| Sukrosa | sumber karbohidrat |
| Glukosa | sumber karbohidrat |
| Ferric citrate | penerima elektron yang dapat memperlihatkan pembentukan H2S oleh bakteri dan juga sebagai bahan buffer |
| Sodium thiosulphate | sumber mineral |
| Phenol red | Indikator pH |
| Distilled Water | Pelarut |
D. Cara Pembuatan Medium TSIA
- Formula TSIA menurut produk Oxoid adalah 65 gram / liter akuades. Jadi untuk membuat 1 liter / 1000 ml medium dibutuhkan sebanyak 65 gram serbuk medium TSIA yang dilarutkan kedalam 1 liter akuades.
- Timbang medium menggunanakan timbangan analitik agar lebih presisi.
- Larutkan 65 gram medium kedalam 1 liter akuades dengan cara dipanaskan pada suhu 80°C sambil diaduk menggunakan alat hot plate and magnetic stirrer. Pastikan medium larut dengan sempurna dan tidak terjadi penggumpalan.
- Atur pH medium hingga mencapai 7.4 ± 0.2.
- Mengatur pH medium dapat menggunakan alat pH meter agar hasilnya lebih akurat. Apabila saat pengukuran awal medium mempunyai pH diatas 7.4 maka dapat ditambah larutan HCL sedikit demi sedikit. Dan sebaliknya apabila pH medium lebih rendah dari 7.4 dapat ditambah larutan NaOH.
- Medium yang telah jadi dimasukkan kedalam tabung reaksi dan ditutup dengan tidak rapat / renggang.
- Sterilisasi medium menggunakan autoklaf pada suhu 121°C dan tekanan 2 Atm selama 15 menit.
- Setelah disterilisasi dan medium masih bersifat cair, tabung reaksi dapat dimiringkan hingga 45 derajat atau lebih dan disisakan untuk bagian tegak.
- Tunggu medium hingga memadap dengan sempurna sebelum digunakan.
- Inokulasi dilakukan dengan menusukkan jarum inokulum ke media tegak dilanjutkan dengan streak di bagian miring.
E. Interpretasi Uji Medium TSIA
| Medium Miring | Medium Tegak | Interpretasi |
| Merah | Kuning | Fermentasi glukosa saja, pepton dikatabolisme |
| Kuning | Kuning | Fermentasi glukosa dan laktosa dan/atau sukrosa |
| Merah | Merah | Tidak ada fermentasi, pepton dikatabolisme |
| Merah | Tidak ada perubahab | Tidak ada fermentasi; Pepton digunakan secara aerobik |
| Kuning | Kuning + gelembung udara | Fermentasi glukosa dan laktosa dan/atau sukrosa, gas diproduksi |
| Merah | Kuning + gelembung udara | Fermentasi glukosa saja; gas diproduksi |
| Merah | Kuning + gelembung udara + endapan hitam | Fermentasi glukosa saja; gas diproduksi; H2S diproduksi |
| Merah | Kuning + endapan hitam | Fermentasi glukosa saja; H2S diproduksi |
| Kuning | Kuning + endapan hitam | Fermentasi glukosa dan laktosa dan/atau sukrosa,H2S diproduksi |
| Tidak ada perubahan | Tidak ada perubahan | Tidak ada fermentasi |
F. Sumber & Referensi
- http://www.oxoid.com/
- https://microbenotes.com/
- https://www.austincc.edu/
0 Response to "Triple Sugar Iron Agar (TSIA) - Definisi, Komposisi, Cara Pembuatan dan Interpretasi Uji"
Post a Comment