Starch Casein Agar (SCA) - Definisi, Komposisi, Cara Pembuatan dan Interpretasi Hasil

Starch Casein Agar (SCA) merupakan medium untuk mengisolasi bakteri sakarolitik salah satunya dari kelompok Aktinomisetes. Aktinomisetes adalah bakteri yang mirip jamur karena mempunyai semacam hifa dan mampu membentuk filamen panjang bercabang didalam tanah. Komponen starch atau pati pada medium SCA adalah sumber karbon utama yang hanya dapat dimetabolisme oleh bakteri Aktinomisetes karena memiliki enzim sakarolitik.

{tocify} $title={Daftar isi}

A. Definisi dan Kegunaan Medium Starch Casein Agar (SCA)

Medium Starch Casein Agar (SCA) adalah medium yang digunakan untuk mengisolasi, kultivasi, propagasi, preservasi maupun produksi senyawa metabolit sekunder dari kelompok bakteri Aktinomisetes.

Aktinomisetes merupakan kelompok bakteri yang memiliki karakter mirip fungi (jamur) karena dapat membentuk rantai spora. Apabila koloni Aktinomisetes ditumbuhkan pada medium SCA akan tampak bermiselium, baik dipermukaan medium (miselium aerial) maupun dibawah permukaan medium (miselium substrat) mirip pertumbuhan fungi.

Bakteri Aktinomisetes mempunyasi sifat dinding sel berupa Gram positif (+) dan mampu memproduksi senyawa bioaktif. Senyawa bioaktif yang dihasilkan Aktinomisetes diantaranya senyawa antibiotik, biopestisida, obat-obatan farmasi, herbsida, antiparasit dan enzim. Beberapa eksplorasi senyawa aktif Aktinomisetes telah menemukan isolat-sisolat baru yang mempunyai kemampuan menghasilkan antibiotik untuk melawan bakteri patogen resisnten.

Dalam penggunaannya medium SCA dapat dimodifikasi dengan penambahan komponen lain seperti zat antifungi (nistatin) untuk menghambat pertumbuhan fungi. Kelompok fungsi juga dapat tumbuh baik pada medium SCA karena mempunyai enzim sakarolitik. Sehingga zat antifun perlu ditambahkan pada saat menggunakan medium untuk melakukan isolasi bakteri Aktinomisetes.

B. Komposisi Starch Casein Agar (SCA)

Berikut merupakan komposisi medium Starch Casein Agar (SCA) berdasarkan formulasi dari Gause's No. 1 dan dari produk Himedia.

1. Komposisi SCA Menurut Gause's No.1 Medium

Soluble Starch / Pati	10 gram
Casein	0,3 gram
KNO3	2 gram
MgSO4.7H2O	0,05 gram
K2HPO4	2 gram
NaCl	10 gram
CaCO3	0,02 gram
FeSO4.7H2O	0,01 gram
Agar	10 gram
Distilled Water	1 liter
Final pH	7.2 ± 0.2 @ 25°C

2. Komposisi SCA Produk Himedia

Starch / Pati	10 gram
Casein Powder	1 gram
Sea Water	37 gram
Agar	15 gram
Distilled Water	1 liter
Final pH	7.2 ± 0.2 @ 25°C

C. Cara Membuat Starch Casein Agar (SCA)

Cara pembuatan medium SCA menurut formulasi dari Gause's No. 1 dan dari produk Himedia adalah sebagai berikut: 

1. Medium SCA Menurut Gause's No.1 Medium

1. Formula medium SCA menurut Gause's No.1 Medium adalah sesuai tabel diatas untuk 1 liter larutan.
2. Pertama timbang masing-masing komponen medium menggunanakan timbangan analitik agar lebih presisi.
3. Larutkan 10 gr starch / pati kedalam 500 ml akuades dengan cara dipanaskan pada suhu 80°C sambil diaduk menggunakan alat hot plate and magnetic stirrer. Pastikan starch larut dengan sempurna dan tidak meninggalkan gumpalan (ditandai larutan berwarna agak jernih).
4. Larutakan secara terpisah mineral KNO3, MgSO4.7H2O, K2HPO4, NaCl, CaCO3, FeSO4.7H2O kedalam 500 ml akuades hingga terlarut sempurna. 
5. Larutan mineral dicampur menjadi satu kedalam larutan starch dan panaskan kembali pada suhu 80°C sambil diaduk menggunakan alat hot plate and magnetic stirrer. Kemuadian tambahkan komponen casein sedikit semi sedikit hingga terlarut sempurna. Dan yang terakhir masukkan agar sebagai pemadat dan aduk hingga terlarut sempurna.
6. Atur pH medium hingga mencapai 7.2 ± 0.2 pada suhu 25°C.
7. Masukkan medium kedalam masing-masing tabung erlenmeyer / tabung reaksi sesuai volume yang diinginkan dan tutup dengan rapat.
8. Sterilisasi medium menggunakan autoklaf pada suhu 121°C dan tekanan 2 Atm selama 15 menit.
9. Setelah disterilisasi dan medium masih dalam kondisi cair (sekitar suhu 45-50 °C), medium dapat ditambah zat antifungi / nistatin (sesuai dosis). Penambahan komponen ini bertujuan untuk menghindari pertumbuhan jamur mikroskopis yang tidak diinginkan saat digunakan.
10. Setelah kompenen tambahan terlarut, medium dapat secara langsung dituang ke masing-masing cawan petri sesuai kebutuhan.

2. Medium SCA Produk Himedia

1. Formula medium SCA menurut Himedia adalah 63 gram / liter akuades. Jadi untuk membuat 1 liter / 1000 ml larutan dibutuhkan sebanyak 63 gram medium bubuk SCA yang dilarutkan kedalam 1 liter akuades.
2. Pertama timbang medium menggunanakan timbangan analitik agar lebih presisi.
3. Larutkan 63 gram medium kedalam 1 liter akuades dengan cara dipanaskan pada suhu 80°C sambil diaduk menggunakan alat hot plate and magnetic stirrer. Pastikan medium larut dengan sempurna dan tidak meninggalkan gumpalan.
4. Atur pH medium hingga mencapai 7.2 ± 0.2.
5. Masukkan medium kedalam masing-masing tabung erlenmeyer / tabung reaksi sesuai volume yang diinginkan dan tutup dengan rapat.
6. Sterilisasi medium menggunakan autoklaf pada suhu 121°C dan tekanan 2 Atm selama 15 menit.
7. Setelah disterilisasi dan medium masih dalam kondisi cair, medium dapat ditambah zat antifungi / nistatin (sesuai dosis). Penambahan komponen ini bertujuan untuk menghindari pertumbuhan jamur mikroskopis yang tidak diinginkan saat digunakan.
8. Setelah kompenen tamahan terlarut, medium dapat secara langsung dituang ke masing-masing cawan petri sesuai kebutuhan.

D. Interpretasi Pertumbuhan Aktinomisetes pada Medium SCA

Kontrol Positif	Pertumbuhan Koloni
Aktinomisetes	Koloni bertekstur seperti bubuk (powdery), berwarna putih, krem atau abu-abu. Terbentuk pigmen warna yang terlarut didalam medium sekitar pertumbuhan koloni.
Kontrol Negatif	Pertumbuhan Koloni
Medium tanpa diinokulasi	Tidak ada pertumbuhan

E. Sumber & Referensi

• Akbar, R.A., Riyandini, D. dan Kusharyati, D. F. 2017. Potensi Aktinomisetes Asal Tanah Perakaran Mangrove Segara Anakan Cilacap Sebagai Penghasil Antifungi Terhadap Yeast Patogen Candida albicans. JTBB Vol. 2, pp 39-44. DOI: 10.22146/jtbb.26554.
• Himedialab.com
• Jiang, Y., Li, Q., Chen, X., dan Jiang, C. Isolation and Cultivation Methods of Actinobacteria. Actinobacteria - Basic and Biotechnological Applications. DOI: 10.5772/61457.
• Ryandini, D., Radjasa, O.K., dan Oedjijono. Isolate Actinomcetes SA32 Origin of Segara Anakan Mangrove Rhizosphere and its Capability in inhibiting Multi-Drugs Resistant Bacteria Growth. Journal of Microbial & Biochemical Technology, 2018 10:1. DOI: 10.4172/1948-5948.1000386. 
• Zhang, J. 2011. Improvement of an Isolation Medium for Actinomycetes. Journal of Modern Applied Science, 5(2), pp. 124-127. DOI: 10.5539/mas.v5n2-124.

Follow

MicrobeHolic Situs berbagi ilmu Biologi dan Mikrobiologi. Silahkan follow situs ini untuk mendapatkan update terbaru.

Share this post